mRNA Cap 2′-O-甲基转移酶（50U/μL）说明书

mRNA Cap 2′-O-甲基转移酶（50U/μL）说明书

产品描述

mRNA Cap2氧甲基转移酶（mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase）是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在RNA的5´末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2´-O位置处添加一个甲基基团。该酶利用SAM作为甲基供体来甲基化加帽RNA，从而形成Cap1结构。Cap1结构能增强mRNA的翻译效率，因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达。该酶需要有m7GpppN即7-甲基鸟苷帽结构的RNA作为底物。

产品性质来源：携带牛痘病毒2'-O-甲基转移酶基因的E. coli分子量：82 kDa纯度：≥95%比活：50 U/μL比活单位定义：在 37℃下1 h内将10 pmol 80 nt 的带帽RNA转录物甲基化所需要的酶量定义为1个活性单位存储缓冲液：20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% TritonX-100，50%甘油，pH 8.0 产品组分

产品应用【Uncapped RNA 一步加帽法 】适用于10 μg以内 uncapped RNA（≥100 nt）的加帽反应，反应体系20 μL，且可根据实验需要放大。1. 取10 μg RNA，用RNase free water将适量RNA稀释至14 μL；2. 将RNA置于65℃加热5 min，结束后冰上放置5 min；3. 按照右侧表格依次加入各组分；4. 37℃反应60 min；5. RNA加帽完成，可进行后续实验。

【 Cap 0-RNA 的甲基化反应 】适用于10 μg以内 Cap 0-RNA（≥100 nt）的甲基化反应，反应体系20 μL，且可根据实验需要放大。1. 用RNase Free Water将适量RNA稀释至15 μL；2. 将RNA置于65℃加热5 min，结束后冰上放置5 min；3. 按照右侧表格依次加入各组分；4. 37℃孵育60 min；5. RNA加帽完成，可进行后续实验。

注意事项： （1）用于加帽反应的RNA在使用前应进行纯化并溶解于RNase free water 。溶液中不能含有EDTA和盐。（2）加帽酶反应前加热RNA可以去除转录产物5′的二级结构。如果转录产物的5′端结构复杂，可将加热时间延长至10 min。（3）如果转录产物的5′端结构复杂，为提高加帽效率可将反应时间延长至120 min。（4）SAM在室温下会逐渐降解，SAM降解会导致N 7 甲基化效率降低，会进一步导致加帽失败，因此需始终放置在冰上。此外，也可以通过体系优化适当提高用量以保证加帽反应顺利进行。 其他用途可参考上述用途或相关文献资料进行实验 运输和保存方法

运输条件：蓝冰/干冰运输

保存温度：-20℃以下保存

避免反复冻融或频繁暴露于温度变化中，shou次使用时建议进行分装。

产品效期：12个月

注意事项

1. 使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存；

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

3. 产品仅供研究使用