T4 DNA聚合酶 (Exo-)说明书

产品详情

T4 DNA聚合酶是来源于T4噬菌体的DNA聚合酶，又名T4 gp43，分子量为104kDa，在T4噬菌体DNA复制中负责先导链和滞后链5’→3’方向的脱氧核糖核酸合成。T4 DNA polymerase的聚合酶活性强于DNA 聚合酶 I，不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。本T4 DNA polymerase(exo-)为通过点突变D219A改造，使其3'-5' 外切核酸酶活性大大降低，但保留了完整的聚合酶活性。

本公司T4 DNA polymerase 是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

特点

Ø 无链置换活性

Ø 无5’-3’外切酶活性，不能进行切口平移

Ø 3’-5’外切酶活性大大地降低

Ø 热失活：75°C for 20 min

浓度

5U/μl

活性定义

一个活力单位即在37℃条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

活性测定条件

1×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer：20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，10 mM MgCl₂，0.5mM DTT，0.1mg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C)，37℃温育

酶贮存缓冲液

     20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，10 mM MgCl₂，5mM DTT，50% Glycerol，pH 7.5。

产品包装规格及组成

适用范围

Ø 缝隙填充(无缺口平移活性)

Ø 去除3’突出单链或补平5’突出单链，形成平末端

Ø 生成无缝克隆中的5’突出端，实现基因和载体的互补配对

应用举例

1.补平5’突出单链，形成平末端

1）按下表配制反应体系

2) 37℃×30min反应，

3）75℃×15min失活酶，

按需进行后续实验。

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

运输与保存

-20℃可保存2年，避免反复冻融。

注意事项

l 适用于凹陷单链区聚合补平反应（聚合酶反应）的缓冲液包括：AM Buffer A-D、A1-D1、T4 DNA连接酶反应缓冲液。

l 鉴于AM Buffer B2是此酶最youBuffer，当使用不包含BSA的缓冲液时，建议补充BSA。

l Activity in AM Buffers：AM Buffer A: 60% ；AM Buffer B、C、D: 100%。

l 离子强度超过100 mM时活性将被抑制，SH基的还原剂促进活性。

l 活性易受模板DNA高级结构影响，T4 gene 32（T4 SSB）蛋白可以显著提高聚合酶活性。